产品货号:
BTN15-159376
中文名称:
甲型-乙型流感病毒qRT-PCR检测及分型试剂盒(探针法)
英文名称:
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是根据探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的甲型流感病毒和乙型流感病毒的检测和分型试剂盒。
保存:-20℃,有效期1年。
使用前需要在引物探针干粉管中加入160μL的自备超纯水,震荡混匀后再取用。一次没用完剩下的需要放-20℃保存。
一、稀释标准曲线样品
以101~106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本制品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品,需要另外订购。
二、样品RNA的制备
三、Probe qRT-PCR反应
四、数据处理
相关搜索:甲型-乙型流感病毒qRT-PCR检测及分型试剂盒(探针法),流感病毒检测,流感病毒分型,乙型流感病毒,甲型流感病毒,甲流病毒,乙流病毒,探针法,定性检测,定量检测,荧光定量RT-PCR,双重荧光
人类的流感主要由甲型流感病毒(Influenza A Virus)和乙型流感病毒(Influenza B Virus)引起,其中甲型流感病毒曾多次引起世界性大流行,乙型流感病毒常常只引起局限性流行。因此有必要及时对流感病毒进行检测和分型,以采取不同的防范措施。
- 即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。
- 引物和探针经过优化,灵敏性高。
- 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
- 特异性高,引物是分别根据甲型流感病毒和乙型流感病毒的高度保守区设计,不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
- 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5各数量级。
- 既可用检测,又可用于分型。甲型流感病毒的探针使用FAM标记,乙型流感病毒的探针使用HEX标记。
- 本制品只能用于科研。
组分 | 规格 |
探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
甲型-乙型流感病毒qRT-PCR引物-探针混合液干粉 | 50T |
甲型流感病毒qRT-PCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
乙型流感病毒qRT-PCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存:-20℃,有效期1年。
使用前需要在引物探针干粉管中加入160μL的自备超纯水,震荡混匀后再取用。一次没用完剩下的需要放-20℃保存。
一、稀释标准曲线样品
以101~106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本制品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品,需要另外订购。
- 标记6个离心管,分别为6、5、4、3、2、1。
- 用带芯枪头分别加入40μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。
- 在6号管中加入两种浓度为1×107拷贝/μL的阳性对照各5μL,充分震荡1分钟,得浓度各为1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头,在5号管中加入5μL上步稀释所得的样品,充分震荡1分钟,得浓度各为1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头,在4号管中加入上步稀释所得的样品,充分震荡1分钟,得浓度各为1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
- 如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号管中的样品再加上一定量的水使总体积跟样本制备试剂盒所要求的起始样本体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容,也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应
- 如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个RT-PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板),1个用于RT-PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的样品做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):
成分 样品管
N+2个RT-PCR
阴性对照标准曲线样品管
(1~6管)探针法qRT-PCR缓冲液 各10μL 10μL 各10μL 探针法qRT-PCR酶混合液 各2μL 2μL 各2μL 甲型-乙型流感病毒qRT-PCR引物-探针混合液 各3μL 3μL 各3μL N+2个待测RNA样本 各5μL 不加 不加 超纯水 不加 5μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(1~6号) 不加 不加 各5μL - 盖上盖子后上机,按下面参数进行RT-PCR:
过程 温度 时间 逆转录 50℃ 15min 预变性 95℃ 3min PCR反应
(45个循环)95℃ 15sec 60℃ 60sec(采集FAM和HEX通道的荧光信号,
FAM的淬灭基团为TAMRA,
HEX的淬灭基团为MGB)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值,再推算出其浓度。FAM信号得到的Ct值制备的标准曲线用于计算甲型流感病毒的浓度,HEX信号得到的Ct值制备的标准曲线用于计算乙型流感病毒的浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须没有读数,或者大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于40。对待测样品,如果其Ct没有读数、大于或等于40则均为阴性,如果小于40则为阳性。FAM信号得到的Ct推断出的结果针对的是甲型流感病毒,通过HEX信号得到的Ct推断出的结果针对的是乙型流感病毒。
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